Анти-ХИВ активност in vitro на MGN-3, активиран арабиноксилан от оризови трици

Анти-ХИВ активност in vitro на MGN-3, активиран арабиноксилан от оризови трици

Автор: Мамду Гонуум

Отделение по оториноларингология, Медицински и научен университет Древ, Лос Анджелис, Калифорния

Получена на: 19 декември 1997 г.

MGN-3, арабиноксилан от оризови трици, модифициран ензимно с екстракт от мицел на Hyphomycetes, беше изследван за анти-ХИВ активност in vitro. Активността на MGN-3 срещу ХИВ-1 (щам SF) беше проучена в първични култури на периферни кръвни мононуклеарни клетки (PBMC). MGN-3 инхибира репликацията на ХИВ-1 чрез:

  1. Инхибиране на продукцията на антигена p24 на ХИВ-1 по дози-зависим начин – при концентрации от 12,5, 25, 50 и 100 µg/ml се наблюдава намаляване с 18,3%, 42,8%, 59% и 75% съответно;
  2. Инхибиране на образуването на синцитий, максимално (75%) при концентрация от 100 µg/ml.

Допълнителни изследвания показаха, че приемането на MGN-3 при концентрация 15 mg/kg/ден води до значително увеличаване на митогенния отговор на Т и В клетки 2 месеца след лечението: 146% за PHA, 140% за Con A и 136,6% за PWM митоген. Заключаваме, че MGN-3 притежава мощна анти-ХИВ активност и, при липса на значителни странични ефекти, показва обещаващи резултати като агент за лечение на пациенти с ХИВ/СПИН.

Цел на изследването:
Човешкият имунодефицитен вирус (ХИВ) е причинител на синдрома на придобитата имунна недостатъчност (СПИН). ХИВ представлява една от основните заплахи за човешкия живот по света. Според няколко източника (Център за контрол на заболяванията, Американски Червен Кръст и други здравни организации), приблизително 1,5 милиона души в САЩ и до 50 милиона по света са заразени с ХИВ. Прогнозите сочат, че до 2000 г. заразените ще достигнат 110 милиона (2% от световното население).

Материали и методи:

MGN-3: MGN-3 представлява арабиноксилан, извлечен от оризови трици, който е обработен ензимно с екстракт от мицел на Basidiomycetes. Този полизахарид съдържа /3-1,4 ксилопиронова хемицелулоза.

Среда за култивиране: Средата за култивиране (RPMI-1640) е допълнена с 1% антибиотици (v/v) и 20% фетален телешки серум с рекомбинантен IL-2.

Продукция на p24 антиген: PBMC от трима здрави индивида бяха инкубирани с PHA за три дни, след което обработени с ХИВ-1 (щам SF) и MGN-3 при различни концентрации. Концентрациите на p24 антиген бяха измерени чрез ELISA.

Образуване на синцитий: PBMC от пет пациенти със СПИН бяха култивирани в присъствие или отсъствие на MGN-3. Образуваните синцитии бяха преброени и анализирани.

 Фигура 1. Модел на хемицелулоза, извлечена от оризови трици, обработена ензимно с гликозидази от мицел на Hyphomycetes. Основната химична структура на MGN-3 е арабиноксилан с ксилоза в основната верига и арабинозен полимер в страничната верига.

 

 

 Клетъчна жизнеспособност: Viability се измерва чрез MTT анализ. Жизнеспособността на клетките се определя в рамките на 4, 7 и 11 дни след инфекция.

Резултати:

Продукция на антиген p24: MGN-3 демонстрира дозо-зависима инхибиция на репликацията на ХИВ-1 в PBMC. Средно, концентрации от 25, 50 и 100 µg/ml намалиха продукцията на p24 антиген съответно с 42,8%, 59% и 75%. Данните показват вариации в отговора между различни пациенти.

Ефект върху синцитий: MGN-3 значително инхибира образуването на синцитий. Максималната инхибиция от 75% бе наблюдавана при концентрация от 100 µg/ml.

Влияние върху Т и В клетки: Приемът на MGN-3 в продължение на два месеца доведе до значително повишаване на пролиферацията на Т и В клетки. Увеличението за PHA, Con A и PWM митогени беше съответно 146%, 140% и 136,6%.

 

 

 

 

 

 

Фигура 2. Ефект на MGN-3 върху продукцията на антигена p24 на ХИВ-1. Данните представляват средни стойности и стандартно отклонение за трима различни индивида от Таблица 1.

Жизнеспособност на клетките: Нямаше значителна разлика в жизнеспособността на клетките след третиране с MGN-3, като се установи добра поносимост към препарата.

Заключения: MGN-3 показва потенциал като мощен антивирусен агент срещу ХИВ-1, без да предизвиква токсични ефекти. Данните предполагат, че този препарат може да бъде полезен в комбинирана терапия за лечение на ХИВ/СПИН.

Ефект върху образуване на синцитий: MGN-3 значително потиска образуването на синцитий, като ефектът е дозозависим. Максималната инхибиция (75%) е регистрирана при концентрация от 100 µg/ml. Според анализа, синцитиите са основен маркер за клетъчната инфекция при ХИВ, а потискането им показва ефективността на MGN-3 като антивирусно средство.

Данни за синцитий: При концентрации от 12.5, 25, 50 и 100 µg/ml, намалението на образуване на синцитий е съответно 38.5%, 50%, 62.5% и 75%. Това доказва, че MGN-3 е мощен инхибитор на тази критична фаза от вирусната инфекция.

Заключителни бележки: MGN-3 продължава да показва впечатляващи резултати като допълнение към терапии за пациенти с ХИВ/СПИН. Ефективността му в потискането на вирусната репликация и поддържането на клетъчна жизнеспособност го превръща в потенциален кандидат за по-широки клинични изследвания.

Обсъждане: В това изследване демонстрирахме, че MGN-3 притежава инхибиращ ефект върху репликацията на ХИВ in vitro без да проявява цитотоксичност. MGN-3 е съставен от денатурирана хемицелулоза, получена чрез обработка на оризова хемицелулоза с множество въглехидратно-хидролизиращи ензими от мицел на Hyphomycetes.

Основната химична структура на MGN-3 е арабиноксилан с ксилоза в основната си верига и арабинозен полимер в страничната верига. MGN-3 е доказан като мощен биологичен модификатор на отговор (BRM), който активира активността на естествените килърни клетки (NK) както in vivo, така и in vitro.

Резултатите от настоящото изследване също показват, че MGN-3 действа като антивирусен агент, инхибиращ производството на антиген p24 на ХИВ-1 и образуването на синцитий.

Един от основните проблеми при анти-ХИВ агентите е наличието на странични ефекти. Продължителната употреба на лекарства като азидотимидин и други аналози води до сериозна токсичност и развитие на резистентност. В тази насока, MGN-3 предлага алтернатива без подобни недостатъци.

Фигура 3. In vivo действие на MGN-3 върху митогенния отговор на Т и В клетки два месеца след лечението. PBMC бяха култивирани за три дни в присъствие или отсъствие на PHA, Con A и PWM. Беше изследвана инкорпорацията на тритий (3H). Данните представляват средни стойности и стандартно отклонение за пет различни индивида. *p<0.001, **p<0.05.

 

Проучването подчертава и ролята на полизахариди от растителни източници, като хемицелулозите на оризови трици, с доказана биологична активност в различни модели. Предишни изследвания отбелязват потенциала на тези полизахариди за индуциране на имунен отговор и противоракови ефекти. MGN-3 е също така безопасен, което го прави обещаващ кандидат за клинични приложения.

References:

  1. Gl1oneum, M., and Manattala, G. (1996) Abstract 87th Annual Meeting of tl1e American Association of Cancer Research, Washi11gton DC, April 22-24, 1996.
  2. Gl1oneum, M. (1995) Abstract Cancer: The Jnterference between Basic a11d Applied l{esearch. An American Association for Can° cer Researcl1 (AACf{) Special Confere11ce, Baltimore, MD. Noven1ber 5-8, 1995.
  3. Johnso11, V. A., and Wall{er, B. D. (1990). iii ‘l’ecl1niques ir1 HIV Research (Aldovini, A., and B. D. Wall{er Eds.), pp. 92-94, Stockton Press, New York.
  4. Larder, B. A., Darby, G., and Richman, D. D. (1989) Scien,ce 243, 1731-1734.
  5. Boucl1er, C. A. B., Ters1nette, M., Lange, J.M. A., et al. (1990) Lancet 836, 585-590.
  6. Japour, A. J., \Velles, S., D’Aquila, R. T., et al. (1995) J. Infect. Dis. 171, 1172-1179.
  7. Schenck, G., and Brieslcorn, C.H. (1944) Arch .. Pliarni. Ber. Dtsch. Ges. 282, 1-9.
  8. Ki1cera, L. S., Cohe11, R. A., and I-Iarrmann, E. C. Jr. (1965) Ann N. Y. Aca-d. Sci. 130, 474-482.
  9. Ha1Tmann, E. C, Jr., and J(i1cera, L. S. (1967) Proc. Ex. Biul. Med. 124, 869-874.
  10. Harrmann, E. C. Jr., and Kucera, L. S. (1967) Proc. Ex. Biol. Med. 124, 874-978.
  11. Wheeler, S. R. (1979) Science 204, 6.
  12. Gollapudi, S., Sharma, H. A, Aggarwal, S., Byers, L. D., Ensley, H. E., and Gupta, S. (1995) Biochem. Biophys. Res. Commun. 210, 145-151.
  13. Lai, P. K., Donovan, J., Takayama, J., Sakagami, H., Tanaka,Vol. 243, No. 1, 1998 BIOCHEMICAL AND BIOPI-IYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS A., Konno, K., and Nonoyama, M. (1990) AIDS Re. HLlman Retroviruses 6, 205-217.
  14. Takeo, S., Kado, H., Yamamoto, H., Kamimur_a, M., Watanabe, N., Uchida, K., and Mori, Y. (1988) Chem. Pharm. Bull. 36, 3609-3613.
  15. Takenaka, S., (1992) Chemosphere 25, 327-334.
  16. Tsuji, H., Nomiyama, :J(., Ikeda, K., Kawatoko, T., Cai, J. P., Fujishima, M., and Takal1ashi, K. (1991) Fukuoka lgaku Zasslii Fukuoka Acta Medica 82, 330-334.
  17. Ghoneum, M., Namattala, G., and Kim, C. (1996) FASEB Journal oftlie American Society for Biocheniistry and Molecular Biology, New Orleans, LA, June 2-6, 1996.
Отворено, рандомизирано клинично изпитване за оценка на имуномодулиращата активност на новоолигозахариден съединение при здрави възрастни

Функционални храни в здравето и болестите 2012, 2(7)

Научна статия – Отворен достъп

Отворено, рандомизирано клинично изпитване за оценка на имуномодулиращата активност на новоолигозахариден съединение при здрави възрастни

 

Карийм Х. Али1, Анджелика Б. Мелио2, Сузана М. Леонард2, Дешратн Астхана2, 3, Джуди М. Уолгър4, Аарон Х. Уолфсън5, Х. Реджиналд МакДаниел6 и Джон Е. Луис2
1 Фармакогнозия, P.O. Box 971, Rainier, WA 98576; 2 Катедра по психиатрия и поведенчески науки, 3 Лаборатория за клинични и биологични изследвания, 4 Катедра по медицина и 5 Катедра по лъчетерапия към Университета на Маями Miller School of Medicine, 1120 NW 14th Street, Маями, FL 33136; 6 Fisher Institute for Medical Research, 2701 Osler Dr Suite 6B Grand Prairie, TX 75051

Автор за кореспонденция:
Джон Е. Луис, доктор, доцент, Катедра по психиатрия и поведенчески науки, Университет на Маями Miller School of Medicine, 1120 NW 14th Street, Suite #1474 (D21), Маями, FL 33136, САЩ

Дата на подаване: 29 юни 2012 г., Дата на одобрение: 26 юни 2012 г.; Дата на публикуване: 28 юли 2012 г.

РЕЗЮМЕ

Предистория:
Съединението „Оризови трици арабиноксилан“ (RBAC) е хранителна добавка, произведена чрез ензимна хидролиза на хемицелулоза B, извлечена от оризови трици. Редица in vitro изследвания и клинични доклади показват, че RBAC притежава обещаващи имуномодулиращи ефекти, по-специално по отношение на активността на естествените убийствени клетки и цитокините. Концепцията за истински имуномодулатор представлява агент с широк спектър на активност, зависещ от състоянието на здравето и имунитета на индивидуалния организъм. Настоящото изследване проучи имуномодулиращия ефект на RBAC върху здраво възрастно човешко население в продължение на 60 дни чрез оценка на промените в цитотоксичността на естествените убийствени клетки (NKCC), цитокините и растежните фактори. Участниците бяха разпределени в две групи в рандомизиран експеримент, като едната група (n=10) консумираше 1 грам/ден, а другата (n=10) – 3 грама/ден. Безопасността и поносимостта на RBAC бяха оценени чрез измерване на общия билирубин, общия протеин, креатинина и чернодробните функции.

 

Резултати:
Открихме, че двете групи показват сходни реакции по отношение на NKCC, цитокините и растежните фактори. NKCC достигна пик на 1-вата седмица, докато интерферон-γ, тумор-некротичен фактор-α, интерлевкини-1α, -1β, -8 и -10, както и епидермален растежен фактор достигнаха пик на 30-тия ден. Всички участници понасяха добавката без никакви нежелани реакции.

Заключения:
Нашите резултати показаха временни, двупосочни ефекти върху имунните маркери, съответстващи на истинска, многофакторна имуномодулация, а не просто на имуностимулация или имуносупресия. С оглед на нашите открития, имуномодулиращата активност на RBAC заслужава допълнително проучване.

 

ПРЕДИСТОРИЯ
Естествени убийствени клетки (NK клетки). Разбирането за естествените убийствени (NK) клетки еволюира значително от първоначалната им характеристика през 1975 г. като големи гранулирани цитотоксични лимфоцити на вродената имунна система. Въпреки че не притежават антиген-специфични клетъчни повърхностни рецептори, NK клетките имат способността да разпознават и унищожават трансформирани клетки. Това се осъществява чрез освобождаване на гранзим и перфоринови гранули, които предизвикват клетъчна смърт чрез апоптоза. За да модулират цитотоксичните си действия и да поддържат толерантност към нормални човешки клетки, NK клетките притежават разнообразие от активиращи и инхибиторни рецептори.

Клетките, трансформирани от вирусна инвазия или злокачествено развитие, могат да бъдат идентифицирани и елиминирани в ранните си стадии от различни имунни ефекторни клетки [1]. Животински и човешки изследвания показват, че NK клетките играят централна роля в имунния надзор върху трансформирани клетки [2;3]. По-голямата част от популацията NK клетки се намира в състояние на покой. Следователно броят на NK клетките в периферната кръв корелира слабо с ефективността, а цитотоксичността на NK клетките (NKCC) обикновено се използва за мониторинг на нивата на функцията на NK клетки [4].

Функциите на NK клетките също включват производство на про-възпалителни и имуносупресивни цитокини, включително: интерферон-гама (IFN-γ), тумор-некротичен фактор-алфа (TNF-α), моноцитен хемоатрактивен протеин-1 (MCP-1, известен още като CCL2) и интерлевкин (IL)-10. Идентифицирането и елиминирането на туморни клетки се улесняват от действията на IFN и други фактори [5]. Макрофаговите и Т-клетъчните отговори също се модулират чрез генериране на IFN-γ и IL-10 от NK клетките.

 

Имуномодулация. Имуномодулаторът може да се определи като вещество, което модулира отговора на имунната система в защита на организма. В човешкото тяло този ефект може да включва усилване или намаляване на активността на специализирани клетки, антитела или имунни химически вещества (напр. цитокини), както и други специфични модификации на средата и физиологията на организма.

Съединението „Оризови трици арабиноксилан“ (RBAC) е търговски достъпен медицински гликонутриентен комплекс. В литературата се споменава под различни търговски имена (включително MGN-3 и Biobran) с доказана активност като имуномодулатор in vivo при мишки и хора и in vitro при ракови клетъчни линии [6-8].

In vitro изследвания показват, че различните концентрации на RBAC усилват фагоцитната активност на макрофагите и активността на цитокините IFN-γ, TNF-α и IL-6 [8;9]. Въпреки това ефектът на RBAC върху нормалното, здраво население остава до голяма степен неизвестен. Предвид потенциалните ползи за човешкото здраве, установени в предходни клинични случаи и биологични механистични изследвания, е очевидно, че е необходимо задълбочено изследване на имуномодулиращата активност на RBAC [10].

В пилотно проучване изследвахме ефекта от 60-дневен прием на RBAC върху NKCC, цитокини и растежни фактори в извадка от здрави възрастни. Проследяваха се нежелани реакции, както и общ билирубин, общ протеин, креатинин и чернодробни функционални тестове, за да се потвърди съществуващата документация за безопасност и толерантност при хора.

 

МЕТОДИ
Участници в изследването. Участниците (n = 20) бяха набрани чрез препоръки в Медицинския факултет на Университета в Маями през 2010 г. Проучването се проведе с одобрение от Етичния съвет за изследвания върху хора към Университета в Маями, като всички участници подписаха информирано съгласие и форми по HIPAA преди включване. Извадката се състоеше от 40% мъже (n = 8) и 60% жени (n = 12) със средна възраст 33.6 години (Стандартно отклонение = 13.2; диапазон = 20, 66). Расовият/етническият състав на участниците беше следният: 55% бели, не-хиспанци (n = 11), 35% хиспанци (n = 7) и 10% азиатци/тихоокеанци (n = 2).

 

Интервенция.
RBAC (Daiwa Pharmaceutical Inc., Tokyo, Япония) е хранителна добавка, съдържаща активна съставка, патентована и произведена изключително от 1990 г. Тя се продава като функционална храна в Япония. RBAC представлява олигозахариден комплекс, произведен чрез хидролиза на хемицелулоза B от оризови трици с ензими от мицелия на Lentinula edodes, Coriolus versicolor и Schizophyllum commune. Той се изсушава чрез разпръскване в прах, разтворим във вода, и съдържа следните помощни вещества: микрокристална целулоза, хипромелоза, естер на мастни киселини със захароза и калиев ацетат. Полученият олигозахариден комплекс се състои основно от арабиноза и β-1,4-ксилопиранозни единици с малки количества други полизахаридни вериги, включително β-глюкани.

Участниците бяха разпределени в две групи в рандомизиран експеримент. Препоръчителният от производителя диапазон за дозиране е 1-3 грама/ден; следователно, едната група получаваше 1 грам/ден (n = 10), а другата – 3 грама/ден (n = 10) за 60 дни. Всички участници завършиха изследването без отпаднали.

 

Оценка, събиране и обработка на пробите.
Всеки участник попълни основен въпросник за демографски данни и медицинска история при базовата оценка. Венозна кръв беше взета в пет различни времеви точки (начало, 48 часа, 1 седмица, 30 дни и 60 дни). Кръвните проби се събираха в епруветки с хепарин, SST и EDTA и се доставяха в лабораторията в рамките на 2 часа от събирането.

Всички EDTA проби от кръвта бяха подложени на пълен кръвен анализ и автоматизирано диференциално броене на 5 части с напълно автоматизиран хематологичен анализатор Coulter AcT5 (Beckman Coulter, Fullerton, CA). Флоуцитометрично изброяване на T, B и NK клетъчните подгрупи се извърши с 4-цветен флоуцитометър, FACS Calibur (BD Biosciences, San Jose, CA), а различните клетъчни популации бяха анализирани със софтуер Cell Quest Pro (версия 5.2, BD Biosciences, San Jose, CA).

Пробите се съхраняваха при -80°C до използването им. Общ билирубин, общ протеин, креатинин, аланин аминотрансфераза (ALT), аспартат аминотрансфераза (AST) и алкална фосфатаза (ALP) бяха оценени с помощта на химически автоанализатор Olympus AU5400, който използва много-дължинен дифракционен спектрофотометричен метод.

 

Изследване на NKCC чрез флоуцитометрия.
Изследването на NKCC чрез флоуцитометрия беше извършено въз основа на два предходно публикувани метода с някои модификации [11;12]. Клетките K562 бяха закупени от American Type Culture Collection (Rockville, MD). 3,39-Диоктадецилокарбоцианинов перхлорат (DiO; Sigma, St. Louis, MO) беше разтворен в диметилсулфоксид (Sigma, St. Louis, MO) до концентрация 3 mM. Алиquot-и бяха замразени при -30°C и размразявани за всеки експеримент.

Средата RPMI с и без фенол червено беше доставена от Gibco (Carlsbad, CA). Пълната среда (CM) включваше RPMI среда, обогатена с 10% фетален телешки серум, 100 U/ml пеницилин и 100 μg/ml стрептомицин. Пропидиум йодид (PI) (Sigma, St. Louis, MO) беше разтворен в CM за приготвяне на работен разтвор от 10 mg/100 ml. Фетален телешки серум беше осигурен от Cellgro (Manassas, VA).

Ефекторни (PBMC) и таргетни клетки (10 000 клетки) бяха добавени в епруветки за създаване на съотношения ефектор/таргет (E:T) от 25:1 до 6.25:1. Добавени бяха общо 130 μl PI, а епруветките бяха центрофугирани за 30 секунди при 1 000 g за утаяване на ефекторните и таргетните клетки заедно в присъствие на PI. Тези клетъчни смеси бяха инкубирани за 2 часа при 37°C в инкубатор с 5% CO2. Контролните проби включваха само таргетни клетки плюс PI и само ефекторни клетки плюс PI за откриване на спонтанна лиза и нежизнеспособни ефекторни клетки, съответно. След инкубацията клетките бяха анализирани чрез флоуцитометрия. Предварителните и страничните разсейващи параметри бяха настроени за включване на таргетни и ефекторни клетки в придобиващата зона, за да се съберат общо 20 000 събития. Данните бяха анализирани със софтуера CellQuest Pro (BD Biosciences, San Jose, CA). Процентът на лиза беше изчислен, както следва: процент лиза = [Клетки положителни за DiO и PI/Общо етикетирани с DiO клетки] * 100.

 

Мултиплексно тестване на цитокини и растежни фактори.
Поради централната си роля като сигнални съединения в имунната система, цитокините и растежните фактори участват в различни имунологични, възпалителни и инфекциозни заболявания. Новите био-чип технологии за цитокини комбинират съвременни технологични постижения с иновативен дизайн, осигурявайки напълно автоматизирана система за бързо мултиплексно тестване.

 

Статистически анализ.
Данните бяха анализирани с SPSS 19 (IBM Inc., Chicago, IL) за Windows. Бяха изчислени честотни и описателни статистики за всички променливи. Използвахме анализ на вариацията с повторени измервания (ANOVA), за да изследваме ефекта на взаимодействие между групите (1 грам/ден срещу 3 грама/ден) по време на NKCC и цитокините, растежните фактори и други измервания.

 

РЕЗУЛТАТИ
Мерки за безопасност. Таблица 1 показва стойностите на креатинин, общ протеин, общ билирубин, ALT, AST и ALP за двете групи. Не бяха наблюдавани значими разлики в никой от тези показатели между двете групи от началото до 60-ия ден.

За групата с 1 грам/ден, стойността на креатинин при нито един участник не надвиши 0.3 mg/dL над горната граница (< 1.5 стандартно отклонение [SD] от средната стойност [M]), и нито една стойност не беше под долната граница. Общият протеин и общият билирубин бяха в референтните граници за всички времеви точки. Всички стойности на ALP бяха в референтните граници, с изключение на една стойност от -2 U/L на 60-ия ден. Всички стойности на AST бяха в референтните граници, с изключение на една стойност от -4 U/L на 1-вата седмица. Всички стойности на ALT бяха в референтните граници.

За групата с 3 грама/ден, стойността на креатинин при нито един участник не надвиши 0.39 mg/dL над горната граница (< 1.5 SD от M), и нито една стойност не беше под долната граница. Общият протеин беше в референтните граници за всички времеви точки. Нито една стойност на общия билирубин не надвиши 0.5 mg/dL над горната граница (< 2.5 SD от M). Една стойност на ALP беше +4 U/L в началото, една стойност беше +3 U/L на 30-ия ден, и една стойност беше +4 U/L на 60-ия ден.

Една стойност на AST беше +5 U/L в началото, една стойност беше +4 U/L на 1-вата седмица, една стойност беше +41 U/L на 30-ия ден, и една стойност беше +3 U/L на 60-ия ден (първата стойност е за един участник, а последните три стойности са за друг участник). Всички стойности на ALT бяха в референтните граници, с изключение на един участник, при когото стойностите бяха съответно +4, +5, +13, +26 и +17 U/L за всички времеви точки.

Таблица 1. Креатинин, Протеин, Билирубин, Аланин аминотрансфераза, Аспартат аминотрансфераза и Алкална фосфатаза от началото до 60-ия ден

 

 

ЗАБЕЛЕЖКА: Стойностите са представени като средна стойност ± стандартно отклонение (минимум, максимум).

NKCC. Фигура 1 показва промените в NKCC за двете групи от началото до 60-ия ден. Установихме значим ефект за времето (F[3.0,54.0] = 7.2, p = 0.001), но взаимодействието между група и време (p = 0.85) и основният ефект на групата (p = 0.48) не бяха значими. Корекционният фактор на Huynh-Feldt за степените на свобода при ефектите вътре в групите беше 1.000.

За цялата извадка NKCC достигна пик на 1-вата седмица (M = 30.24; стандартна грешка [SE] = 2.07, 95% доверителен интервал [CI]: 25.88, 34.56) и беше значително по-висок от стойностите в началото (M = 22.38; SE = 2.31, 95% CI: 17.52, 27.24; p = 0.016), на 48-мия час (M = 23.86; SE = 2.13, 95% CI: 19.38, 28.34; p = 0.028), на 30-тия ден (M = 20.32; SE = 1.71, 95% CI: 16.73, 23.91; p = 0.001) и на 60-ия ден (M = 20.32; SE = 2.51, 95% CI: 15.05, 25.59; p = 0.001).

Няма други стойности, които да са значително различни помежду си.

 

Фигура 1. Цитотоксичност на NK клетките от началото до 60-ия ден
NKCC (процент лиза) в началото, на 48 часа, 1 седмица, 30 дни и 60 дни беше измерена чрез флоуцитометричен анализ. Както е показано и описано в текста, NKCC достигна пик на 1-вата седмица и беше значително по-висока от всички останали стойности, като дори спадна под стойността в началото при оценките на 30-ия и 60-ия ден.

Цитокини и растежни фактори.
Таблица 2 показва описателните стойности за всички 12 цитокини и растежни фактори в началото, на 1 седмица, 30 дни и 60 дни за цялата извадка и двете групи. Не установихме значими ефекти за IL-4 и IL-8.

Таблица 2. Цитокини и растежни фактори от началото до 60-ия ден

 

ЗАБЕЛЕЖКА: Стойностите са представени като средна стойност ± стандартно отклонение (минимум, максимум).

За IL-2 беше установен значителен ефект за времето (F[2.7,47.7] = 3.3, p = 0.037), но взаимодействието между групата и времето (p = 0.51) и основният ефект на групата (p = 0.72) не бяха значими. Корекционният фактор на Huynh-Feldt за степените на свобода за вътрешногруповите ефекти беше 0.884. Сравненията по двойки показаха, че стойността на 60-ия ден (M = 5.53; SE = 0.63, 95% CI: 4.21, 6.85) беше значително по-висока от стойностите на 1-вата седмица (M = 2.65; SE = 0.57, 95% CI: 1.45, 3.85; p = 0.001) и на 30-тия ден (M = 3.31; SE = 0.55, 95% CI: 2.15, 4.47; p = 0.016). Няма други значими разлики.

За IL-6 беше установен значителен ефект за времето (F[2.6,47.5] = 3.5, p = 0.028), но взаимодействието между групата и времето (p = 0.53) и основният ефект на групата (p = 0.15) не бяха значими. Корекционният фактор на Huynh-Feldt за степените на свобода за вътрешногруповите ефекти беше 0.880. За цялата извадка IL-6 намаля на 1-вата седмица, увеличи се на 30-тия ден и отново намаля на 60-ия ден. Сравненията по двойки показаха, че стойността в началото (M = 0.90; SE = 0.24, 95% CI: 0.39, 1.40) беше значително по-висока от стойностите на 1-вата седмица (M = 0.48; SE = 0.15, 95% CI: 0.16, 0.80; p = 0.027) и на 60-ия ден (M = 0.40; SE = 0.15, 95% CI: 0.08, 0.72; p = 0.014). Стойността на 30-тия ден (M = 0.82; SE = 0.11, 95% CI: 0.60, 1.05) беше значително по-висока от стойността на 60-ия ден (p = 0.013). Няма други значими разлики.

За IL-10 беше установен значителен ефект за времето (F[1.5,27.4] = 3.9, p = 0.04), но взаимодействието между групата и времето (p = 0.28) и основният ефект на групата (p = 0.91) не бяха значими. Корекционният фактор на Huynh-Feldt за степените на свобода за вътрешногруповите ефекти беше 0.507. Сравненията по двойки показаха, че стойността на 1-вата седмица (M = 0.22; SE = 0.73, 95% CI: 0.07, 0.38) беше значително по-ниска от стойността на 30-тия ден (M = 0.83; SE = 0.12, 95% CI: 0.58, 1.07), а стойността на 60-ия ден (M = 0.25; SE = 0.19, 95% CI: -0.15, 0.65) беше значително по-ниска от стойностите в началото (M = 0.67; SE = 0.30, 95% CI: 0.04, 1.30; p = 0.009) и на 30-тия ден (p = 0.007). Няма други значими разлики.

За IL-1α беше установен значителен ефект за времето (F[2.2,40.4] = 11.7, p = 0.001), но взаимодействието между групата и времето (p = 0.12) и основният ефект на групата (p = 0.16) не бяха значими. Корекционният фактор на Huynh-Feldt за степените на свобода за вътрешногруповите ефекти беше 0.748. Сравненията по двойки показаха, че стойността в началото (M = 0.56; SE = 0.12, 95% CI: 0.31, 0.80) беше значително по-висока от стойностите на 1-вата седмица (M = 0.13; SE = 0.06, 95% CI: 0.02, 0.25; p < 0.001) и на 60-ия ден (M = 0.14; SE = 0.06, 95% CI: 0.01, 0.27; p < 0.001).

1 седмица (M = 0,50; SE = 0,23, 95% CI: 0,01, 1,00; p = 0,012) и 60 дни (M = 0,33; SE = 0,24,
95% CI: -0,18, 0,85; p = 0,003). Никакви други стойности не се различават значително.
За TNF-α е установен значителен ефект за времето (F[2,9,51,6] = 3,8, p = 0,017), но
взаимодействието между групата и времето (p = 0,48) и основният ефект на групата (p = 0,97) са незначителни.
Корекционният коефициент ώ на степените на свобода на Huynh-Feldt за вътрешносубектните ефекти беше 0.956. Сравненията по двойки показаха, че стойността на 60 дни (M = 0,86; SE = 0,36, 95% CI:0,11, 1,62) е значително по-ниска от изходната стойност (M = 1,78; SE = 0,20, 95% CI: 1,36, 2,21; p = 0,012) и 30-дневните стойности (M = 1,79; SE = 0,34, 95% CI: 1,08, 2,50; p = 0,037). Няма други стойности се различават значително.

За MCP-1 е установен значителен ефект за времето (F[2.1,37.8] = 3,9, p = 0,026), но
взаимодействието между групата и времето (p = 0,87) и основният ефект на групата (p = 0,85) са незначителни. Корекционният коефициент ώ на степените на свобода на Huynh-Feldt за вътрешносубектните ефекти беше 0.700. MCP-1 достига своя връх на 60-ия ден (M = 86,45; SE = 5,93, 95% CI: 73,98, 98,92) и е значително по-висок от изходното ниво (M = 60,72; SE = 4,98, 95% CI: 50,25, 71,18; p = 0,001) и на 1 седмица (M = 71,48; SE = 5,70, 95% CI: 59,51, 83,44; p = 0,05). Никакви други стойности не са се различават значително.

За VEGF е установен значителен ефект за времето (F[2,6,47,3] = 4,8, p = 0,007), но
взаимодействието между групата и времето (p = 0,38) и основният ефект на групата (p = 0,45) са незначителни. Корекционният коефициент ώ на степените на свобода на Huynh-Feldt за вътрешносубектните ефекти беше 0.877. Сравненията по двойки показаха, че стойността в началото на изследването (M = 45,13; SE = 8,21, 95% CI: 27,88, 62,37) е значително по-висока от тази за 1 седмица (M = 29,27; SE = 6,94, 95% CI: 14,70, 43,85; p = 0,02) и 60-дневни стойности (M = 24,06; SE = 5,15, 95% CI: 13,24, 34,87; p = 0,007). Никакви други стойности се различават значително.

За EGF е установен значителен ефект за времето (F[2.1,38.0] = 7,8, p = 0,001), но групата
по време (p = 0,63) и основният ефект на групата (p = 0,82) са незначителни. ώ
степени на свобода Корекционният коефициент на Huynh-Feldt за вътрешносубектните ефекти е 0,703. Сравненията по двойки показаха, че стойността в началото на изследването (M = 32,90; SE = 9,53, 95% CI: 12,88, 52,92; p = 0,034) е значително по-висока от тази на 1 седмица (M = 11,62; SE = 3,19, 95% CI: 4,92, 18,32) и 60 дни (M = 14,70; SE = 2,82, 95% CI: 8,79, 20,61). Стойността на 30 дни (M =53,49; SE = 12,03, 95% CI: 28,21, 78,78) е значително по-висока, отколкото на 1 седмица (p = 0,001) и 60 дни (p = 0,004). Никакви други стойности не са се различавали значително.

ОБСЪЖДАНЕ
Способността на индивидите да се защитават от инфекциозни заболявания и да ограничават прогресията на канцерогенезата зависи както от имунитета, така и от хранителните фактори. Имунният надзор е важна функция за защита на гостоприемника, по-специално тъй като служи за възпрепятстване на прогресията на канцерогенезата и вирусната инфекция. Няколко имунни ефекторни клетки и секретирани цитокини играят решаваща роля в цялостния процес. Очаква се засилването на NKCC от RBAC да да се превърне в засилен имунен надзор. В настоящото проучване RBAC демонстрира значителна имуномодулираща активност въз основа на
въз основа на наблюдаваните промени в NKCC и цитокините и факторите на растежа. Нашите резултати са са в съответствие с предишната работа на други изследователи върху RBAC, показваща способността на този продукт да положително въздействие върху функционирането на имунната система [6-8]. Действието на RBAC беше достатъчно бързо, за да
значително да повиши NKCC в рамките на 1 седмица от приложението при възрастни хора, които са наивни на RBAC. След пика на 1 седмица NKCC спада до изходните нива до 30 дни. Увеличението на NKCC изглежда се дължи по-скоро на повишаване на NK активността на клетъчна основа, отколкото на увеличаване на действителния брой NK клетки. Това се потвърждава от нашето откритие, че по-ниските съотношения Е:Т на 12,5:1 и 25:1 са много ефективни срещу лизиса на клетките K562.
Девет от 12-те цитокини и растежни фактори показват промени с течение на времето за цялата проба (без разлика между групите), по-конкретно между изходното ниво, 1 седмица и 30 и 60 дни. На Th1 цитокиновия профил показва, че IL-2, IFN-γ и TNF-α намаляват на 1 седмица, но значително се увеличават на 30 дни за IFN-γ и TNF-α и на 60 дни за IL-2. Повечето от Th2 цитокините, включително IL-10, показват първоначален спад на 1 седмица и след това се връщат към изходните нива до 30 дни, подобно на тенденцията, наблюдавана при Th1 цитокините.
IL-4 е единственият цитокин, който се увеличава през първата седмица от прилагането на RBAC. Този период съответства пряко на времевия ход на скока на NKCC. Тъй като IL-4 е мощен
на NKCC, съществува вероятност ефектът на RBAC, който повишава NKCC, да е свързан с IL-4
медииран от IL-4. MCP-1 е единственият цитокин, който непрекъснато се увеличава по време на интервенцията. MCP-1 е провъзпалителен хемокин, който функционира като хемоатрактант и активатор на NK клетките. [14;15]. Установено е, че MCP-1 предизвиква миграция на активирани NK клетки in vitro [16]. RBAC на MCP-1 може да действа за подобряване на достъпа на NK клетките до местата на инфекция и/или злокачествена пролиферация. Необходими са допълнителни проучвания, за да се оцени потенциалът на селективните на хемокиновите рецептори на ефекторните клетки след прием на RBAC.

Важно е да се отбележи, че в нашето проучване на RBAC при здрави възрастни открихме отговори които не бяха единствено имуностимулиращи или имуносупресиращи. По-скоро нашето проучване показа преходни, двупосочни ефекти върху имунните маркери, съответстващи на истински многофакторни имуномодулация. Когато се прилага имуномодулатор, може да се предположи, че имунният имунната система става бдителна към съществуващите инфекции и нарушения в организма. При здрав човек нормален възрастен човек, инфекциозното и токсичното присъствие в организма може да е достатъчно малко, за да се постигне оптимално функциониращата имунна система може да го елиминира сравнително бързо. Следователно NKCC и други параметри на имунната активация биха показали само преходно повишаване. При пациенти с функционално компрометиран имунитет (напр. поради фактори на околната среда или навици на живот) или сериозни заболявания (напр. рак, ХИВ/СПИН или други животозастрашаващи инфекции), имунната е необходимо отговорът на системата към даден имуномодулатор да бъде удължен поради по-голямата злокачествени, инфекциозни и токсични заболявания [17].
Значението на НККК за контролиране на прогресията на канцерогенезата е илюстрирано от
откритието, че някои тумори използват механизми за объркване на NK имунонаблюдението, напр, производство на лиганди на NKG2D рецептора [4]. Освен това е установено, че
потиснатите NKCC са свързани с повишен риск от рак; въпреки това специфичните механизми на имуномодулацията остават неясни [18]. Разработването на ефективни терапевтични стратегии ще изисква голяма работа по изясняването на NKCC in vitro и in vivo; особено в идентифицирането на специфични лиганди, активиращи NK рецепторите.
Изследователите, фокусирани върху биоактивните природни продукти, са идентифицирали различни полизахариди, които притежават имуномодулираща активност [19]. Клинични и лабораторни изследвания  са показали ефекти както върху вродената, така и върху адаптивната имунна система, а полизахаридните рецептори са открити върху NK-клетки, Т- и В-лимфоцити, макрофаги, моноцити и други ефекторни клетки [20]. По този начин фракциите или изолатите на РБАК могат потенциално да съдържат лиганди на NK рецептори или аналогични молекулярни видове, които могат да се използват като експериментални сонди. За отбелязване е, че
олигозахаридите, присъстващи в RBAC комплекса, имат структурна хомология със сиалил Lewis x
които са известни лиганди на NK клетъчни рецептори, подобни на лектините, и активатори на NKCC [21;22].
Освен това олигозахаридните молекули могат да функционират като лиганди за естествените рецептори за цитотоксичност
[23].
В редица центрове се полагат изследователски усилия за използване на функциите на NK клетките с цел подобряване на както на пациенти с рак, така и на пациенти с висок риск от развитие на злокачествени заболявания [24]. Терапевтични стратегии, съчетаващи агенти, които активират противотуморната имунна с цитотоксични химиотерапевтични агенти могат да подобрят резултатите от лечението на рака.
Освен това IL-2 предизвиква увеличаване на NKCC по начин, подобен на RBAC, и
комбинирането на двата агента може да доведе до адитивен или синергичен ефект, полезен за лечението на на малигнен меланом и бъбречноклетъчен карцином. Това е от особен интерес, тъй като може да позволи да се намали дозата на IL-2, като по този начин се намали токсичността, без да се компрометира терапевтичната ефикасността. По-нататъшно изясняване на клетъчните и молекулярните механизми, участващи в противотуморната имунния отговор. Като се има предвид, че метастазите са причина за 90 % от смъртните случаи от рак при хората [25], RBAC или подобни имуномодулатори могат да позволят разработването на истински превантивни противоракови стратегии чрез оптимизиране на NKCC. Това потенциално би могло да даде възможност за трансформиране на клетки при клинично неоткриваеми стадий на канцерогенеза и циркулиращите туморни клетки (ЦТК) да бъдат елиминирани преди тяхното да се превърнат в първични или метастатични тумори. Това носи значителен потенциал за подобряване на
резултатите в клиничната и хирургичната онкология, където пациентите имат съществуващи CTCs и/или развиват CTCs вторично в резултат на механични нарушения на злокачествените тъкани [26;27].
По този начин резултатите от нашето проучване предполагат, че имуномодулацията на RBAC заслужава по-нататъшно при хора; по-специално при наличие на състояния, при които имунната система е и/или функционално компрометирана, напр. тютюнопушене, грип, ХИВ/СПИН и
рак. Очакваме, че RBAC може да: (а) да улесни унищожаването на злокачествени и вирусно инфектирани клетки, (б) да повиши активността на имунните ефекторни клетки, (в) да оптимизира функцията на имунната система, и (г) да подобри възстановяването на гостоприемника, дългосрочното поддържане на здравето и цялостното качество на живот.
Ограничения. Резултатите от това проучване са ограничени от малкия размер на извадката. По-голяма извадка може да доведе до още по-значими резултати за NKCC, цитокини и растежни фактори в освен това да се засили още повече разликата в резултатите между двете групи на дозиране. Той не беше възможно да се определи обективно спазването на протокола, тъй като съставът на RBAC комплекс не се поддава лесно на оценка на метаболитите. Въпреки че установихме, че най-висок пик в NKCC на 1 седмица и в повечето от цитокините и растежните фактори на 30 дни, се период на проследяване от 6 до 12 месеца с продължително прилагане на RBAC би могъл да изясни способността на RBAC да модулира функцията на имунната система за продължителен период от време.

ЗАКЛЮЧЕНИЯ
В обобщение, RBAC се понася добре от всички участници. Всички субекти завършиха всички без да съобщава за нежелани събития, а оценките са извършени своевременно по подходящ начин. Добавката обикновено е била безопасна за субектите в двете групи на дозиране според
измерванията на креатинина, общия протеин, общия билирубин, ALT, AST и ALP. RBAC демонстрира солидна имуномодулираща активност със значителни отговори при NKCC и девет от дванадесетте
цитокини и растежни фактори. Не бяха установени статистически разлики между двете дозировки групи в измерените параметри. Следователно двете дози, препоръчани от
производителя на РБАК (т.е. 1 грам/ден и 3 грама/ден) изглеждат еквивалентни по отношение на
по отношение на наблюдаваните ефекти върху NKCC, цитокините и растежните фактори при здрави възрастни. Нашето проучване показа преходни, двупосочни ефекти върху имунните маркери, съответстващи на истинските многофакторна имуномодулация. Важна тенденция, отбелязана в профилите на активност на няколко имуномодулатори от природни продукти е тази на „оптимизация“ или истинска имуномодулация, а не а не просто повишаване или понижаване на имунния отговор. По този начин здравият се очаква отговорът на здравия човек към даден имуномодулатор да се различава значително от отговора на реакция по време на заболяване като грип, ХИВ/СПИН или рак. Необходими са още проучвания, за да се сравни ролята на NKCC и на цитокините и растежните фактори. след прием на РБАК, за да се очертае допълнително селективното и продължително активиране на NK на RBAC. И накрая, резултатите от това проучване при здрави хора показват, че имуномодулиращата активност на RBAC трябва да бъде проучена в условия, при които човешката имунна система система е функционално компрометирана: напр. тютюнопушене, рак, ХИВ/СПИН и др.
RBAC може не само да улесни унищожаването на туморните и заразените с вируси клетки, но и да увеличи активността на имунните ефекторни клетки и може да подобри възстановяването на гостоприемника, дългосрочното здраве и цялостното качество на живот чрез оптимизиране на функцията на имунната система.

Списък на съкращенията
естествен убиец (NK), NK клетъчна цитотоксичност (NKCC), интерферон-гама (IFN-γ), туморна некроза фактор-алфа (TNF-α), моноцитен хемотактичен протеин-1 (MCP-1), интерлевкини (IL) 2-10, оризови трици арабиноксиланово съединение (RBAC), аланин трансаминаза (ALT), аспартат аминотрансфераза (AST), алкална фосфатаза (ALP), диоктадецилоксакарбоцианин перхлорат (DiO), пълна среда (CM), пропидиев йодид (PI), ефектор-цел (E:T), съдов ендотелен растежен фактор (VEGF), епидермален растежен фактор (EGF), дисперсионен анализ (ANOVA), стандартно отклонение (SD), средна стойност (M), стандартна грешка (SE), доверителен интервал (CI) и циркулиращи туморни клетки (CTCs)
Конкурентни интереси: Karriem H. Ali е получил доходи от Daiwa Pharmaceutical Inc., като
като член на нейния научен консултативен съвет. Никой от другите автори няма конкурентни интереси. да докладват.

Принос на авторите: Али, Астана, Уулгър, Уолфсън, Макданиъл и Луис, и
Мисис Мелило и Леонард са допринесли за разработването на проучването. Д-р Али, д-р Астана, д-р Уулгър,
Wolfson, McDaniel и Lewis допринесоха за написването на статията. Д-р Али, д-р Астана,
Уолфсън и Люис, както и госпожите Мелило и Леонард допринесоха за анализа на данните.
Благодарности и финансиране: Благодарим на всички доброволци за участието им
в осъществяването на това проучване. Това проучване беше подкрепено с дарение от Daiwa Pharmaceutical Inc., Токио, Япония, която е производител на RBAC, и средства за научни изследвания и обучение от Лабораторията за клинични и биологични изследвания към Университета в Маями, Miller School of Medicine. Daiwa Pharmaceutical Inc. не е участвала в разработването на това проучване.

СПОРАЗУМЕНИЯ
1. Carayannopoulos LN, Yokoyama WM: Recognition of infected cells by natural killer
клетки. Curr Opin Immunol 2004, 16:26-33.
2. Lee SH, Miyagi T, Biron CA: Поддържане на NK-клетките във високорегулирана антивирусна война.
Trends Immunol 2007, 28:252-9.
3. Smyth MJ, Hayakawa Y, Takeda K, Yagita H: New aspects of natural-killer-cell
и терапия на рака. Nat Rev Cancer 2002, 2:850-61.
4. Vivier E, Raulet DH, Moretta A, Caligiuri MA, Zitvogel L, Lanier LL, Yokoyama WM,
Ugolini S: Вроден или адаптивен имунитет? Примерът с естествените клетки-убийци. Science
2011, 331:44-9.
5. Kim R, Emi M, Tanabe K: Cancer immunoediting from immune surveillance to immune
бягство. Имунология 2007, 121:1-14.
6. Ghoneum M, Jewett A: Производството на тумор некротизиращ фактор алфа и интерферон-гама
от човешки лимфоцити от периферна кръв чрез MGN-3, модифициран арабиноксилан от ориз.
и синергията му с интерлевкин-2 in vitro. Cancer Detect Prev 2000, 24:314-24.
7. Ghoneum M: Anti-HIV активност in vitro на MGN-3, активиран арабиноксилан от оризови зърна.
от оризови трици. Biochem Biophys Res Commun 1998, 243:25-9.
8. Ghoneum M, Abedi S: Enhancement of natural killer cell activity of aged mice by
модифициран арабиноксилан от оризови трици (MGN-3/Biobran). J Pharm Pharmacol 2004, 56:1581-8.
9. Ghoneum M, Matsuura M: Augmentation of macrophage phagocytosis by modified
арабиноксилан оризови трици (MGN-3/Biobran). Int J Immunopathol Pharmacol 2004, 17:283-
92.
10. Markus J, Miller A, Smith M, Orengo I: Метастатичен хемангиоперицитом на кожата
лекуван с широка локална ексцизия и MGN-3. Dermatol Surg 2006, 32:145-7.
11. Chang L, Gusewitch GA, Chritton DB, Folz JC, Lebeck LK, Nehlsen-Cannarella SL:
Бърз флоуцитометричен анализ за оценка на активността на клетките естествени убийци. J Immunol
Methods 1993, 166:45-54.
12. Kane KL, Ashton FA, Schmitz JL, Folds JD: Определяне на функцията на естествените клетки убийци
чрез поточна цитометрия. Clin Diagn Lab Immunol 1996, 3:295-300.
13. Sachdeva N, Yoon HS, Oshima K, Garcia D, Goodkin K, Asthana D: Biochip arraybased analysis of plasma cytokines in HIV patients with immunological and virological
и вирусологично несъответствие. Scand J Immunol 2007, 65:549-54.
14. Carr MW, Roth SJ, Luther E, Rose SS, Springer TA: Monocyte chemoattractant protein 1
действа като хемоатрактант на Т-лимфоцитите. Proc Natl Acad Sci U S A 1994, 91:3652-6.
Functional Foods in Health and Disease 2012, 2(7):265-279 Page 279 of 279
15. Xu LL, Warren MK, Rose WL, Gong W, Wang JM: Human recombinant monocyte
хемотактичен протеин и други С-С хемокини се свързват и предизвикват насочена миграция на
дендритни клетки in vitro. J Leukoc Biol 1996, 60:365-71.
16. Allavena P, Bianchi G, Zhou D, van DJ, Jilek P, Sozzani S, Mantovani A: Induction of
естествените клетки убийци от моноцитния хемотактичен протеин-1, -2 и -3. Eur J
Immunol 1994, 24:3233-6.
17. Barbour SE, Nakashima K, Zhang JB, Tangada S, Hahn CL, Schenkein HA, Tew JG:
Тютюн и пушене: фактори на околната среда, които променят отговора на гостоприемника (имунен
система) и оказват влияние върху пародонталното здраве. Crit Rev Oral Biol Med 1997, 8:437-
60.
18. Imai K, Matsuyama S, Miyake S, Suga K, Nakachi K: Natural cytotoxic activity of
на лимфоцитите от периферната кръв и честотата на раковите заболявания: 11-годишно проследяване на
населението. Lancet 2000, 356:1795-9.
19. Tzianabos AO: Polysaccharide immunomodulators as therapeutic agents: structural
аспекти и биологична функция. Clin Microbiol Rev 2000, 13:523-33.
20. Di RL, Yefenof E, Klein E: Функцията на човешките NK клетки се засилва от бета-глюкан,
лиганд на CR3 (CD11b/CD18). Eur J Immunol 1991, 21:1755-8.
21. Higai K, Ichikawa A, Matsumoto K: Свързване на сиалилов Lewis X антиген с лектиноподобни
на NK клетките индуцира цитотоксичност и тирозиново фосфорилиране на 17-kDa
протеин. Biochim Biophys Acta 2006, 1760:1355-63.
22. Ohyama C, Kanto S, Kato K, Nakano O, Arai Y, Kato T, Chen S, Fukuda MN, Fukuda
M: Клетките естествени убийци атакуват туморни клетки, експресиращи високи нива на сиалил Lewis x
олигозахариди. Proc Natl Acad Sci U S A 2002, 99:13789-94.
23. Wu P, Wei H, Zhang C, Zhang J, Tian Z:

Действие на “BioBran” при диабет – проф. Икуо Охара
Възможности за задържане на хиперглекимията (повишено ниво на глюкоза в кръвта) чрез механизъм на действие различен от този при конвенционалните диетични фибри
Броят на пациентите с диабет се е увеличил бързо през последните години. Може да се види, че дори границата на анормалната глюкозна толерантност ускорява артериосклерозата. Това демонстрира необходимостта от подход осигуряващ превенция и ранно подобряване.
“BioBran” (арабиноксиланно съединение на оризови трици), предлагани от Daiwa Pharmaceutical Co., Ltd., има свойствата на хранителни фибри, като се очаква те да забавят усвояването на захарта от организма. В настоящия брой сме поканили професор Икуо Охара от Aichi Gakusen University за да разясни  потенциалните възможности за подобряване при хиперглекимия след  приемането на “BioBran” , базирайки се на негови експериментални данни.
 
Потенциална превенция от захарен диабет възоснова на свойствата на диетични фибри
 – Първо, какво е вашето разбиране за захарен диабет като специалист по храните ?
Охара: Моето разбиране за захарен диабет е, че това е хронично състояние на хиперглекимия произтичащо от задържането на захар от клетките, причинено от недостатъчното  действие на инсулина  и инсулинова резистентност.
Искам да подчертая, че това е метаболитно заболяване, което води до анормален метаболизм на липиди и протеини освен захарта. Мисля, че появата на много усложнения, включително хиперлипидемия и хипертония водят до цялостно влошаване на метаболизма.
 – Защо започнахте да използвате “BioBran” и каква полза очаквате при
захарен диабет ?
Охара: Оризовите трици са биопродукт получен при очистване на ориз и обикновено са неизползваеми за храна поради лошя му вкус. Част от него се използват за растителна или животинска храна.
BioBran е хранителна добавка получена от оризови трици и доказано има имуномодулаторно действие поради засилването НК клетъчната активност. Макар че се очаква “BioBran” да има същите функции  като диетичните фибри, които забавят увеличаването на кръвната глюкоза, досега не е имало сведения за неговото действие при захарния диабет. Затова започнах да изучавам възможностите за превенция и лечение на захарен диабет с “BioBran” чрез експериментални животни.
Подтискането увеличаването на кръвната глюкоза след  глюкозна проба  и тенденцията към подобрение на липидния метаболизъм са потвърдени
 – Изучавали сте  връзката между приемането на “BioBran” и нивото на кръвната глюкоза. Ще Ви помоля да опишете това проучване.
Охара: На плъхове се дава диабетичен индуктор стрептозоцин (STZ) непосредствено след раждането, което води до развитието на патологично състояние, близко до човешкия диабет тип 2 след израстването. Проведен е експеримент, като се използва такъв плъх с тип 2 захарен диабет, при който отделянето на инсулин се запазва. Плъхове са били разделени на 3 групи: на здравата контролна група се дава 1,7% целулозна храна, на диабетна група се дава 1,7% целулозна храна, а на другата диабетна група се дава 1% “BioBran” (+ 0,7% целулоза) ad libitum за 60 дни. След 60 дни се прави   биохимичен анализ на плазмата, при който кръвния инсулин, кръвната глюкоза, триглицеридите и общия холестерол се определят.
 – Какви са резултатите от експеримента?
Охара: На 58-мият установяваме, че концентрацията на кръвна глюкоза бързо се покачва  след направата на перорален тест за глюкозна търпимост (OGTT) ден при диабетичната група, на която е даваан 1,7% целулозна храна в сравнение с контролната група. От друга страна, след направата на глюкозен тест се вижда ,че бързото нарастване на кръвната глюкоза  е подтиснато при групата на диабетните плъхове получавали “BioBran”.
 – Какви са резултатите от биохимичен анализ на плазмата?
Охара: Увеличението на общия холестерол в кръвта е значително подтиснато при диабетната група получвала “BioBran.” (фиг.2)
 
В друг експеримент ,където  диабетните плъхове са третирани с “BioBran” – 75 мг/кг за 20 дни, концентрацията на общия кръвен холестерол и свободните мастни киселини е по-ниска. (фиг.2 и 3). В този експеримент рязкото покачване на кръвната глюкоза е отново подтиснато.
 
Физиологическата активност при ниска концентрация предполага участието на ниско молекулярната компоненти
До каква степен механизма на действие на хранителните фибри допринася за спиране на повишаването на кръвната захар след захарна проба?
Охара: Задържането на кръвната захар от хранителните фибри се обяснява с намалено и забавено усвояване на захарта поради промени при вискозитета в стомашно-чревния тракт. Независимо от това BioBran проявява физиологична активност като хранителните фибри дори при много ниска концентрация. Това е забележително.Тенденцията за подобряване на диабета се наблюдават при около 1 / 5 до 1 / 10 от дозите на другите хранителни добавки. Физиологичната дейност на “BioBran” не може да бъде обяснена само с функциите на диетичните влакна .
 – BioBran” е много различен от традиционните хранителни фибри нали?
Охара: По принцип, хранителната фибра, приемана орално не се абсорбира от чревната лигавицата. Ето защо, получените резултати предполагат участието на ниско молекулни компоненти способни да проникнат в чревната лигавицата и да бъдат усвоени.
BioBran се произвежда от хидролизирана разтворима хемицелулоза извлечена от оризови трици с помоща на ензими от гъбата шитаке. Потвърдено е, че съдържа ниско молекулни компоненти с молекулно тегло от около 200. Освен промяната на вискозитета в стомашно-чревния тракт, ниско молекулните компоненти могат да бъдат транспортирани до граничните клетки-четки, където да въздействат върху рецепторте на панкреаса и инсулина  директно.
Тези експериментални резултати демонстрират потенциала за превенция и подобряване на анормалния глюкозния толеранс.
Охара: Разбира се, “BioBran” може да бъде полезен за прeдпазване от захарен диабет. Навиците при хранене са много важни за предотвратяването на диабета. В бъдеще бих искал да разширя научни изследвания, вземайки под внимание различни условия, като хранене и упражнения.
 – Какво бъдеще очаквате за хранаителните добавки?
Охара: В основата на превенцията от различните заболявания и подръжането на здравето е правилното хранене. Независимо от това, редовното хранене не винаги може да осигури достатъчна хранителност. Освен това има хора, които имат трудности при хранене и такива, които се хранят лошо поради стареенето. Така че, основното е хранене и упражнения, и ако има някакъв недостиг, той трябва да бъде допълнен с хранителни добавки. Това би бил един начин за ефективно използване на функционалните храни.
Ползата за пациенти с рак в напреднал стадий – д-р. Килхачиро Такахара
Изследовател: д-р. Килхачиро Такахара
Клиника: Хирургичнa клиника Sano, Япония
Срок: юни 1998 – декември 1999
Цел: Да се даде оценка на действието на Biobran чрез сравнение на контролна група пациенти с рак в напреднал стадий получаващи стандартно лечение в Хирургично клиника Sano и сходна група пациенти, получаващи Biobran в допълнение към конвенционалната терапия.
Дозировка: 3 грама Biobran на ден
Тестови областти: NK клетъчна активност и CD4/CD8 нива
Брой пациенти: 205 общо, от които 109 пациенти в контролната група, получаващи конвенционално палиативно лечение и 96 пациенти в Biobran групата, получаващи хранителната добавка в допълнение към стандартната терапия. (Забележете, че всички тези пациенти са категоризирани с рак в много напреднал стадий и вече не получават реално лечение, а само такова намаляващо болката.)
Резултати: Процента оцелели от контролните групи и Biobran групата бе анализиран през срока на изследването. Пациентите са разделени в 5 групи всяка в зависимост от ниво им на НК клетъчна активност: над 40% НК клетъчна активност; 30,0 – 39,9% активност; 20,0 – 29,9% активност; 10,0 до 19,9% активност; и под 9,9% активност. Общия процент оцелели през този период е бил 33,9% за контролната групата и 54,2% съответно за Biobran групата. При пациентите с над 40% НК клетъчна активност в Biobran групата има над 81% оцелели. Така че общия процент оцелели нараства значително при комбиниране на конвенционално лечение и хранителната добавка Biobran в Хирургичната клиника Sano, която има утвърдена репутация в Япония.
Коментар: При това проучване се използва много малка група, 205 общо от пациенти с рак в много напреднал стадий, получаващи само облекчаващо лечение в клиниката в Япония. Периода на експеримента е само година и половина и не е ясно какъв би бил процентът излекувани при тези пациенти за по-продължителен период от време. Като цяло, интересното при това изследване е, че то показва някаква зависимост между увеличаването на броя оздравели пациенти и повишената НК клетъчна активност. Тъй като пробите са малки и вида на рака не е посочен, тези данни са по-полезни за да се стимулират допълнителни изследвания, отколкото да се правят заключения. Важно е да се отбележи, че при липса на по-дълг срок за следене на болните не може да се допуска, че някой от пациентите са живели много след края на изследването. Въпреки това изглежда, че Biobran е удължил живота на някои от тези пациенти с рак в напреднал стадий, освен това вече е добре известно, че тази хранителна добавка може значително да подобри качеството на живот за тези пациенти, както и пациенти подложени на действително лечение (като например химиотерапия и лъчетерапия).
Третиране на множествена миелома чрез използването на Биобран – проф. М. Гьонеум
Интервю с  проф. М. Гьонеум от UCLAand Drew Medical College
 
Доказано е, че производните на арабиноксиланните оризови трици (в частност “BioBran”) са МЕРО (модификатор на естествените реакции на организма), който активира НК клетките и се използва като алтернатива за лечението на редица заболявания, поради свойството си да засилва имунната система. Проф. М. Гьонеум от UCLA and Drew Medical College е водещ изследовател в областа на раковите образования и НК-клетките, и има проведени много клинични изследвания използвайки “BioBran”. Наскоро той направи ново изследване за ефекта от третиране с BioBran при множествена миелома. Тук професорa разказва за своето проучване и  за възможността за използването на BioBran в комбинирани терапии.
Проучвания на ефикасността при множествена миелома, с акцентиране върху активизирането на НК клетките
 – Можете ли да ми обясните защо сте започнали да изследвате действието му при  множествена миелома?
Гьонеум: Аз смятах, че НК клетките, които действат като първоначален отбранителен механизъм на организма могат да бъдат активирани от множествена миелома по-лесно, отколкото при солидни тумори и поради това че  BioBran действа директно върху НК клетките може да ги активизира по-рано и по-силно. Идеята е, че натрупването на ракови клетки потиска активността на клетките на имунната система, като НК клетки например при появата на солиден тумор. От друга страна при рак на кръвта раковите клетките се разпространяват през цялото тяло, което улеснява НК клетките при атаката на индивидуални ракови клетки.
– Какво действие очаквате да има “BioBran” ?
Гьонеум: Действието на “BioBran” може най-общо да се раздели на две основни области: активиране на НК клетки и намаляване разсейването на раковите клетки пряко или косвено, като сме демонстрирали тези ефекти в няколко изследвания. Също така сме показвали, че приемането на “BioBran” с конвенционални лекарства против рак е ефикасен начин да се лекуват туморни клетки с многолекарствена резистентност (ТКМР) като HL/60 AR.
Случай при който BJP стана нормална и функцията на имуноглобулинен синтез се възстановени
 – Можете ли да ми разкажете за случаи от настоящото изследване?
Гьонеум: Пациент от мъжки пол на възраст 58г. почувства силна болка от петия  прешлен на гръбнака до първия на кръста. Кумулативната стойност на Бенс-Джоунс протеинова екскреция (BJP) в урината му за повече от 24 часа е 1100 мг / ден. Имуноелектрофорезиса на пикочния протеини е направен с помощта на антисеруми характерни за IgG, свързани Капа и ламбда леки вериги. Получените свободни Капа и ламбда протеинови вериги показват, че двете отделни протеинови съединенния от 56,2% и 18,9% са свободни еднотипни Капа леки протеинови вериги. Аспирацията на костен мозък показва, 30% плазмени клетки.
Този пациент е подложен на химиотерапия и лъчева терапия, но  му се дава около година живот. След като неговото BJP остана над 100 мг / ден и се получиха нежелани реакции,  химиотерапията му беше променена на лечение само с “BioBran” по 3 гр/ ден.
 – Какви се промени във времето след започването на лечение с “BioBran”?
Гьонеум: Неговото BJP намаля до 5 мг / ден петнадесет месеца след започване на лечението с “BioBran”. Нивата на IgG, IgA и IgM серумен имуноглобулин постепенно се увеличават. Не характерен моноклонален пик се наблюдава, което показва, че нормалните функции на имуноглобулин синтез са възстановени.
 – Какво мислите, че  предизвиква спада на неговото BJP?
Гьонеум: Механизмът на действие, чрез който “BioBran” понижава BJP не е напълно известен, но може да е свързано с потискане на Б клетки чрез активирането на НК-клетките. Предишни изследвания показват, че добавянето на НК клетки към Б клетъчна среда води до намаляване производството на антитела, което предполага, че НК-клетките подтискат функцията на Б-клетките.
Скорошно проучване показа, че това инхибиране е свързано с (1)  активирането на НК клетки, (2) прякото взаимодействие между НК-клетките и Б- клетките,  и (3) производството на интерферон от активираните НК клетки.
 – Как се промени НК клетъчната активност при този пациент ?
 
Гьонеум: Неговата НК клетъчна активност беше 35,4 LU, когато химиотерапията се преустанови, но се повиши до 66,5 LU след две седмици лечение с “BioBran”. Оттогава се е запазила постоянно висока.
 – Какви са резултатите при повишаването на продължителността на живота?
Гьонеум: Единадесет други пациенти, които изследвахме имаха средно- очаквана продължителност на живота около 2 години, като тя беше увеличена почти два пъти, между 3.5 и 4 години. Беше потвърдено, че общия брой  раковите клетки в костния мозък е намалял заедно с понижаването на BJP.
Възможността за комбинация с други типове лечение, включително и лъчева терапия
 – Кое е  най-доброто време за започване на  лечение със “BioBran”?
Гьонеум: При различните методи за лечение на рака е важно  да се повиши издражливстта на имунната система на пациентите и да се подобри  техния начин на живот, например чрез намаляване на стреса, или като  откажат цигарите. Това се отнася за всички видове рак, като по-ранното започване на лечението увеличава процента излекувани.
 – Какво мислите за възможността за комбиниране на “BioBran” с химиотерапия?
Гьонеум: Химиотерапия сама по себе си не може да унищожи всички ракови клетки. Предвид това, ако отчетем многото възможни  комбинации, това може да доведе до създаването на нови  ракови терапии. Мисля, че комбинацията от използването на “BioBran” за подсилване на имунната система е една от възможностите, която може да доведе до по-ефективно лечение.
 – Има ли  възможност за комбиниране на “BioBran” с някой друг вид лечение?
Гьонеум: Вече започнахме да изучаваме комбинирането на “BioBran” с лъчева терапия. Анализираните резултати и получените данни предполагат, че тази комбинация е ефективна. Много е вероятно в бъдеще да се открият и по-ефективни методи за лечение, при комбинирането на “BioBran” с други лечения.
Ефект на подтискане на чернодробни увреждания при BioBran – д-р Хиро Санада

Интервю с д-р Хиро Санада (професор от катедра “Наука на биопроизводството,  Chiba University)

Олигозахаридната лактоза се използва клинично за подобряване на симптомите при чернодробно увреждане. Поради това олигозахаридите се смятат за полезни при предотвратяване на такова увреждане. В действителност, експериментални изследвания с плъхове показват, че  олигозахаридите предпазват и подтискат чернодробните увреждания. Д-р Хиро Санада (професор по биохимия, Катедра Наука на биопрпизводството в Chiba University “) се е насочил към арабиноксилан, който е основен компонент на хемицелулозата, полизахарид от растителен произход. Изучавайки ефекта на подтискане на чернодробните увреждания чрез BioBran (производен на арабиноксилан, получен чрез биологични модификации при обработката на  оризови трици с ензими от гъби шитаке) се доказва, че BioBran има превантивно действие при предизвикани от глактозамин чернодробни увреждания, въпреки че точния механизм е неизвестен. Той възнамерява да проучи ефекта му при различни видове чернодробни болести. Тук, Д-р Санада е интервюиран относно ефекта на BioBran при чернодробно увреждане.
 
Ефекти от BioBran потвърдени при различни експериментални чернодробни увреждания
          – Защо започнахте да изучавате ефекта на BioBran при чернодробно увреждане?
 
Д-р Санада: Има две основни причини. Първо, моят предшественик д-р Юко Аяно (заслужил професор в Chiba University) установи, че хемицелулозите, полизахаридите от растителен произход, имат превантивен ефект върху  предизвиканото от Д-глактозамин чернодробни увреждания. Преди 15 години този ефект не можеше да бъде научно потвърден, тъй като възпроизводимоста беше много-ниска.
Второ, дизахаридна лактоза е била използвана при клинично подобряване на симптомите при чернодробно увреждане, което предполага възможността за използване на олигозахариди за превенция от такива. Множество  олигозахариди са били изследвани във връзка с превантивните ефекти при причинените от глактозамин чернодробни увреждания при плъховете. Между тях: лактоза, глакто-олигозахариди и рафиноза доказано имат превантивен ефект. BioBran е производен на арабиноксилана, който е основният компонент на хемицелулозата, която се съдържа в житните растения. С други думи  BioBran се състои основно от олигозахариди от арабиноксилан. От това може да се заключи, че той има предпазващ ефект при причинените от глактозамин чернодробни увреждания
 – Какво ще кажте за реалните ефекти на BioBran при увреждания на черния дроб?
Д-р Санада: Нашата лаборатория е проучвала превантивните ефекти на хранителните компоненти върху експериментални чернодробни увреждания. Както и при други олигозахариди, на първо място BioBran се смесва с храната и се дава на плъхове за период от 1 седмица преди проследяване на причиненото от глактозамин чернодробно увреждане. Все пак при групата третирана с BioBran не намалява серумната активност на трансаминазите.
Както е известно, BioBran активира НК-клетките, затова аз мислех, че НК клетъчна активност вероятно се увеличава, когато глактозамина е бил приложен и повишената активност е повишила уврежадането на клетките.
Така, аз дадох BioBran 1 час преди излагането на глактозамин. В резултат на това, чернодробноto увреждане беше осезаемо подтиснато. НК клетъчната активност все още не се е повишила в момента на излагане на глактозамин при тези експериментални настройки. Това предполага, че механизмът на действие на BioBran може да бъде различен от повишаване на НК-клетъчната активност. Подтискащото действие на BioBran се наблюдава след перорално и интраперитонеално приемане.
След това, подтискащия ефект при предизвиканото от ацетоминофен чернодробно увреждане е измерен по същия начин. BioBran има същия инхибиторен ефект при това увреждане.
После направих същия експеримент използвайки naphtylisothiocyanate,за който се знае, че причинява cholestatic чернодробно увреждане. Оказа се, че в този случай BioBran няма същия инхибиторен ефект. Ефектът при причинено от  въглероден тетрахлорид чернодробно увреждане е в процес на изследване.
Евентуално предпазване от остра чернодробна недостатъчност
 – Какво мислите за резултатите от тези експерименти?
Д-р Санада: Причиненото от глктозамин чернодробно увреждане наподобява остра вирусна чернодробна недостатъчност в хистопатология и клинични условия и се използва при експерименти, като модел на болестта. Затова смятам, че BioBran може да бъде полезен за предотвратяване на такива остра недостатъчност.
Като цяло, имунната система в голяма степен участва при вирусните чернодробни увреждания. Причиненото от глактозамин чернодробно увреждане е намалено до известна степен чрез инхибиране на macrophage активност, което предполага участието и на имунната система.
В допълнение към това, глактозамина както и ацетоминофена се смята, че причиняват отслабване на черния дроб, като предизвикват недостиг или дезактивиране на същественоважни компоненти за хепатоцитите.
Остава неизвестно кои съставки на BioBran подтискат развитието на чернодробни увреждания и какъв е механима на инхибиране. В ранните стадии на хепатит вирусните инфекции, повишаващи НК-клетъчната активност имат преимуществото да предотвратяват чернодробни увреждания, тъй като причиняват вирусен растеж чрез унищожаване на заразените клетки.
Комбинация от различни компоненти осигурява ефективна превенция
 – Бихте ли ми разказали за  бъдещите перспективи на вашето изследване.
 
Д-р Санада: Смятам, че BioBran има два компонента, един който активира НК клетките и така потискат развитието на чернодробни вируси и друг, който потиска чернодробна недостатъчност и слабост, независимо от НК-клетъчната активност що се отнася до предотвратяването на чернодробни увреждания. Разбира се, тези компоненти могат да бъдат еднакви.
Наше неотдавнашно изследване показа, че причинените от глактозамин чернодробни увреждания са подтиснати, като на плъховете е давана храна примесена с олигозахариди, получени чрез ензимна хидролиза на хемицелулоза от зърно. Вероятно в този случай не се наблюдава  активиране на НК клетки. Мисля че добрата употреба на тези компоненти може да  улесни предотвратяването на различните видове чернодробни увреждания.
Активиране функцията на имунната система и комбиниране със стандартни терапии – д-р Масааки Кошибу

Изследвания на пациенти, които използват “BioBran”

Методи за лечението на рак, като оперативно отстраняване, химиотерапия и лъчетерапия бележат бърз напредък дори сега, но все още има ограничения. Д-р Масааки Кошибу, интервюирания в този брой е работил в челните редици при лечението на рак като хирург дълго време. Въз основа на неговия опит той подчертава, че когато се държи на качеството на живот на пациента, използването на хранителни добавки базирано на научни доказателства може да бъде полезно.
BioBran, който се произвежда от Daiwa Pharmaceutical Co.  Ltd. (арабоноксиланно съединение от оризови трици) доказано подсилва функциите на имунната система, което предоставя различни възможности за медицинското му приложение. Д-р.Кошибу обяснява третирането с “BioBran” и неговото позициониране, като използва информация от действителни случаи.
“BioBran” в лечението на рак. Разпознат като антиракова добавка – базирано на  на научни доказателства в САЩ
 
 – Първо, как са позиционирани хранителните добавки при лечението на рак?
Кошибу: Откровено моето впечатление е, че в отелните държави има разлика при тяхното приложение. “BioBran” е широко известен и действително се използва като антиракова и хранителна добавка в САЩ и Япония.
Какво Ви накара да обърнете внимание на “BioBran”?
Кошибу: Направил съм много  операции като хирург, но оперативната намеса не е ефективна за рецидивиращ рак. Оцеляването е належащо желание на болните от рак пациенти. Почувствах се безсилен, когато не можех да направя нищо както лекар за тези пациенти. Започнах да търся алтренативни методи за лечение и забелязах функционалната храна (хранителни добавки). Тъй като BioBran има научно доказано действие, сметнах, че си заслужава да опитам да го използвам клинично.
Използване на “BioBran” в комбинация с антиракови агенти и / или лъчетерапия значително намалява туморните маркери
  – Често ли препоръчвате “BioBran” на пациенти с рак?
Кошибу: Да. Знае се, че “BioBran” индуцира апоптоза в раковите клетки. Аз го поставям на в близост до антираковите агенти.
 Опишете случаи, в които действително сте използвал “BioBran.”
Кошибу: Тази графика показва промените при туморен маркер на пациент с прогресивно развиващ се рак на гърдата който претърпя мастектомия (Фигура 1). Тя продължи курса химиотерапия след операцията, но се появиха  болки в гърба след 2 години. Това продължи без да има подобрение. Костна сцинтиграфия показа метастази съсредоточи в първия гръбначен прешлен. Този пациент получи лъчева терапия, в допълнение към химиотерапията и също започна приемането на “BioBran.” Туморния маркер CA153 значително намаля. Болката премина и костната сцинтиграфия показа изчезването на натрупването на радиоактивност в метастатичния фокус. Тя е в добро състояние сега.
Фигура 2 показва промените в туморните маркери при друг пациент с рак на гърдата лумбални метастази. При този пациент туморните маркери намаляха след химиотерапия и лъчетерапия, но след това отново се увеличиха. Допълнително третиране с “BioBran” показва тенденции към подобряване на повишените туморни маркери.
Тези подобрения при  двамата пациенти се считат за резултат от подсилването функциите на имунната систем от “BioBran.” Трябва да бъде медицински оценено, че комбинацията между “BioBran” и конвенционална терапия е ефективна.
  – Твърди се,че “BioBran” намалява  неблагоприятните последици от химиотерапията и лъчевата терапия. Какво мислите за това?
Кошибу: Химиотерапията и лъчевата терапия вредят много на организма, затова наличието на апетит е много важно в такава ситуация. Също е важно да се поддържа качеството на живот на пациента и да им се помогне да издържат курса на лечение.
 – Има ли  разлика при ефект от “BioBran” в зависимост от вида рак?
Кошибу: Както приемането на “BioBran” води до подобряване на пациенти с рак на гърдата, така същото се случва и при пациенти с овариален карцином. Прилагането му при рак на стомаха, рак на белия дроб и жлъчния мехур току що започна.
Какво мислите за възможността за прилагането му при болести, различни от рак?
Кошибу: Въпреки, че са необходими достатъчно проучвания за да се твърди такова нещо, аз смятам, че “BioBran” може да бъде ефективен при заболявания различни от рак, защото може да подсили функциите на имунната система чрез активиране на НК клетки.
Опита ми показва, че пациенти, които продължават да вземат “BioBran” дълго време не се разболяват лесно и дори да се разболеят оздравяват бързо. “BioBran” също подобрява състоянието на пациенти с депресия. Точните механизмите на това разнообразие от действия все още са неизвестни. Въпреки това се  очаква активирането на НК-клетките  да играе важна роля.
Потвърждение на доказателствата е от значение за да може незадължително лечение да допълни стандартните терапии
 
– Вие сте също така председател на Японската фондация за опознаване на рака. Наскоро имало ли е промяна в нагласата на пациентте с рак?
Кошибу: Хирургическите процедури, химиотерапията и лъчевата терапия бележат огромен прогрес. Много от пациентите с рак чувстват, че е възможно да се излекуват .
– Смятам, че  често сте питан от пациенти за добавки. Моля Ви, дайте ми насоки за приемането им.
Кошибу: Ако 3-месечно приемане не даде резултат, аз съветвам пациента да комбинират добавки от различните класове, което обещава подобрение в следствие на различните им механизми на действие.
– Какво мислите за бъдещите перспективи пред хранителните добавки при лечението на рак?
Кошибу: Някои видове рак са все още трудно откриваеми. Мисля, че хранителните добавки ще бъдат важна опция, която допълва стандартните методи на лечение и че ще гарантират директно подобрение. В бъдеще за хранителните добавки ще се изисква натрупване и потвърждаване на доказателствата. Важно е да се потвърди напълно, защо са толкова ефективни. Дори ако добавката е ефективна за един пациент, няма да е задължително това да важи за всички. Мисля, че добавките ще позволят на много пациенти да почувстват подобрение и ще предложат надежда.
Ракова химиотерапия и перспективите пред хранителните добавки – проф. М. Гьонеум

Интервю с д-р М. Гьонеум (Професор от UCLA/DrewMedical College)

 
Сериозните неблагоприятни ефекти от химиотерапията са проблем от години, защото лекарствата против рак въздействат и на здравите клетки. През последните години има значителна промяна в концепцията на конвенционалните лекарства, като например появата на такива, чието действие е насочено към точно определени молекули. Тези лечения, насочени към молекулите се очаква да станат водещи при лечението на рак. Редица изследвания са проведени, за да се намалят нежеланите ефекти, включително и проучвания използващи хранителни добавки в комбинация с конвенционални терапии. Д-р Мамадух Гьонеум (Професор oт UCLA/Drew Medical College ), който разработва нов тип химиотерапия комбинирана с хранителната добавка BioBran (производни на арабиноксиланни оризови трици arabinoxylan) описва най-новите тенденции.
BioBran засилва апоптозата
 – Можете ли да ни обясните механизма на апоптозния ефект на BioBran при раковите клетки?
Гьонеум: Ние провеждаме изследвания с BioBran през последните 15 години от 1994 г. досега. През шесте години от 1994 до 2000 г. акцента бе поставен върху изследването на имуномодулаторните свойства на BioBran. Като резултат от тези изследвания стана ясно, че BioBran засилва активността на НК-клетките, които са първосигналната  защита на организма срещу вирусни инфекции и рак, както и увеличава производството на Т и Б клетки, macrophage и цитокини като TNF и IFN-γ.
През следващите години основно се изучаваще апоптозния ефект на BioBran върху раковите клетки. При здравите клетки съществува равновесие между апоптоза и клетъчна регенерация – хиляди клетки са разрушени от апоптоза, като в същото време нови клетки се регенерират. От друга страна, раковите клетки се размножават с такав скорост, че този баланс се нарушава.
Идеалните лекарств против рак са тези, които засилват апоптозата, докато подтискат размножаването на раковите клетки. Неблагоприятните ефекти на химиотерапията с лекарства против рак обикновено се увеличават при повишаване на дозата, което води до нарастване на болките при пациента. Ние се опитваме да разработиме химиотерапия, която да протича по-леко за пациентите, чрез изследвания в облсатта апоптозата of cancer cells.на раковите клетки.
Концентрирали сме се върху хранителната добавка BioBran (производни на арабиноксиланни оризови трици). BioBran има свойството да разрушава раковите клетки чрез апоптоза. Предишни основни изследвания показаха, че BioBran или унищожава раковите клетки директно или предизвиква апоптоза в тях.
Всъщност, по време на „Международната конференция за изследване на храните, храненето и рака”, проведена през юли миналата година във Вашингтон, BioBran е описан като хранителна добавка, която пряко умъртвява раковите клетки, а непряко подпомага другите лекарства против рак при развиването на апоптоза в раковите клетки. Един инвитро експеримент, в който BioBran е приложен при случай на рак на гърдата също потвърди прякото и комбинирано му действие.
В допълнение инвиво изследване е било проведено с Швейцарски мишки албиноси. Асцитен тумор се е бил образувал в бедрената част на мишката, който е бил третиран с BioBran в коремната кухина и директно върху туморни клетки. Като резултат в контролната група в дните от 8 до 45 туморните клетки са се умножили, докато при мишката получавала BioBran броя им е останал непроменен.Тези резултати бяха сред първите, които демонстрираха инвиво прякото действие на BioBran при разрушаване на раковите клетки.
Проведен е още един експеримент, в който са използвани човешки ракови клетки присадени на голи мишки. Ние прилагахме BioBran по три различни начина: чрез смесването му с храната, директно прилагане в коремната кухина и директно върху туморните клетки. Във всяка група се наблюдава спиране на разстежа на раковите клетки. За механизма си на действие при получаване на точна информация, рецептора на клетъчната мембрана ще предават информация на ядрото чрез caspase 3, caspase 8 и caspase 9. Накрая caspase 3 индуцира апоптоза чрез разлагане на други протеини. BioBran доказано подобряа caspase дейността  значително.
Клиничната ефикасност от комбиниране на терапия с лекарства против рак също е потвърдена
 – Разбирам, че има събрани множество доказателства, натрупани в резултат на различни фундаментални експерименти. Какво ще кажете за клинични тестове  в САЩ?
Гьонеум: За да се изследва действието при хора се използват стари мишки, за които се смята че са сходни модели. Възрастните мишки естествено имат понижен имунитет и са най-подходящи при опити за подсилване на имунниата система. Смята се, че мишките с естествено понижена реакция на имунитета представят добре възрастните хора. Всъщност ние обявихме миналата година, че при експеримент със стари мишки третирани с BioBran се забеляза  значително увеличение на имунитета им.
За пациентите с рак се знае, че имат понижен имунитет а това предполага ,че част от гранулите в НК-клетките са изгубени. Когато се прилага върху възрастни мишки BioBran увеличава гранулите в НК-клетките. Това е интересно откритие.
За резултатите от клиничните тестове на BioBran при хора през 1998 д-р Гудман представя резултати от 32 пациенти на които е даван BioBran и са проследявани в продължение на четири години.
Резултатите показват, че имунитетът при тези пациенти е нараснал и се е  задържал на същото ниво през тези четири години. В действителност се наблюдава значително увеличение на НК-клетките, след приемането на BioBran при пациенти с различни ракови заболявания, като например рак на гърдата, рак на простатата и множествена миелома, чиито НК клетки са били празни и лишени от гранули, както при  възрастните мишки. Тези резултати показват, че BioBran може да подобри действието на НК-клетките, както и на T и Б клетките.
Резултатите от туморните маркери при последяване на пациенти с рак за 6 години от 1994 до 2000 показат, че туморните маркери намаляват, когато се подсили имунната система. Изследвания проведени в Япония и други държави също показат намаление на туморни маркери при  пациентите с повишен имунитет вследствие приемането на BioBran. Подобряване качеството на живот, като намаляване на гаденето и повръщането също така са наблюдавани при пациенти, получаващи комбинирана терапия с BioBran.
Започване на насочена терапия. Действието върху bcl-2 привлича вниманието
 – Tова изследване разкриваефекта при комбинация с лекарства против рак, бихте ли ни разказали за възможностите за приложение при химиотерапията?
Гьонеум: Това е един много интересен въпрос. Според мен, насочената терапия ще бъде във фокуса на вниманието. Много скорошни презентации на международни конференции са насочени към това как да се индуцира апоптоза. Подробностите на този механизъм са изследвани подробно за да се идентифицира клетъчен компонент, който е подходящ за насочена  атака.
Така например, раковите клетки имат способността да инхибират апоптоза по техния маршрут. Фактора контролиращ апоптозата е протеин наречен bcl-2. Той служи като броня, която защитава раковите клетки от апоптоза. Нашите изследвания показват, че BioBran е ефективен срещу левкемични клетки HUT78 и други ракови клетки, тъй като може да проникне и да разруши тази броня. Важно откритие в този случай е ,че BioBran действа директно върху bcl-2.
Друг важен момент е, че BioBran се прилага в комбинация с конвенционални терапии. Определена доза от лекарство против рак е необходимо за разрушаване на раковите клетки. Въпреки това, при комбинация с BioBran тази доза може да бъде намалена. На конференцията на 7-мия Международен симпозиум по предсказуема онкология и международни стратегии проведена във Франция през миналата година са били обявени резултатите на фундаменталните научни изследвания относно увеличаването способността на лекарствата против рак да разрушават туморните клетки при комбинация с BioBran. С други думи, по-ниска доза е била необходима за постигане на желания резултат в групата получаваща комбинирана терапия с BioBran, отколкото в групата, получавала монотерапията с конвенционални лекарства.
Разработване на лечение насочено към апоптоза на молекулярно ниво и  намаляване на вредните ефекти от лекарствата против рак, чрез комбиниране с други субстанции ще осигури опции за  химиотерапията в бъдеще.
Противовъзпалителен ефект – д-р. Юзо Ендо

Силния ефект, който Biobran има върху имунната система отчасти се дължи на способността му да контролира NK клетъчнаната активност на организма. Въпреки това чрез изследвания на алергията д-р Юзо Ендо, ръководител на отдел „Научни изследвания и развитие” в Daiwa Pharmaceutical е открил друг начин, по който Biobran действа на имунната система и как това може да подпомогне предотвратяването на рак.Той е установил, че модифицираните оризови трици подтискат алергичната реакция при мишки с астма, като връзката с рак тук е реакцията на имунната система.

Д-р Ендо обяснява, че през последните петдесет или шесдесет години като че ли има едно изместване на имунната система от TH1 или клетъчна реакция към TH2 или хуморална реакция. TH2 реакцията изглежда да е про-възпалителна, което частично може да обясни общия ръст на възпалителни заболявания, като екземи и астма. Тъй като възпаленията са широко възприемани като причинител на канцерогенезис, намаляването им в организма, може да бъде важно средство за защита от рак. Според д-р Ендо изборът на начин на живот има огромен ефект върху възпаленията в организма и ролята, която лошото хранене, диетите, тютюнопушенето, замърсяването на околната среда и др. оказват не бива да се подценява. На въпроса относно превантивните мерки, които могат да бъдат взети той отговоря: “За да се предпазим от рак е много важно да се намали възпалителния товар върху тялото и Biobran може да бъде част от това.”
Работата на д-р Ендо показва, че чрез Biobran се контролират възпалителните реакции на имунната система и въпреки че доказателствата за това са публикувани черно на бяло на въпроса как точно става това все още не може да се отговори еднозначно. За д-р.Ендо това е насоката за изследване на Biobran и той казва: “Ние знаем, че Biobran е нещо изключително, сега трябва да се направят изследвания за да разберем защо.”
Клинична ефективност на BioBran в имунотерапията на пациенти с хепатит B

Клинична ефективност на BioBran в имунотерапията на пациенти с хепатит B

д-р Трен Чи Мин Фуонг

заместник-началник на отделение по гастроентерология

Резюме:

Вирусът на хепатит B (HBV)е сериозен здравословен проблем от световен мащаб, чиито последици са унищожителни – хроничен хепатит, цироза и хепатогенен рак. По-ефикасните методи на лечение, мащабните програми за имунизация и безопасните техники на инжектиране са в основата на елиминирането на HBVи за намаляване на глобалната заболеваемост и смъртност,свързана с него. Днес основният метод на лечение е антивирусната терапия. Конвенционалното лечение обаче има нежелани странични ефекти, а неговата дълга продължителност крие риск от развитие на резистентност. Освен това антивирусните лекарства са скъпи и възлизат на хиляди долари на година, а в много странине са достъпни.

BioBran е хранителна добавка, която, съчетана с конвенционалното лечение увеличава шансовете за благоприятен изход от заболяването. Документирани са 3 случая на пациенти с вирусен хепатит В, които са лекувани с комбинация от конвенционална антивирусна терапия и BioBran. В тази случаи са вземани кръвни проби за измерване на функцията на черния дроб и имуногенния капацитет, и резултатите са сравнени с промените в клиничното състояние и ултразвуковите изследвания. При всички случаи се наблюдава подобрение. Направени са изводи с цел, увеличаване на ефективността от лечебния процес.

Ключови думи: заразяване с вирус на хепатит B, антивирусна терапия, BioBran

Методи

Хранителната добавка BioBran е поемана орално (доза от 1 саше на 24 часа), комбинирана с антивирусни медикаменти и укрепващи черния дроб добавки. Терапевтичната ефективност се оценява чрез измерване на нивата на чернодробните ензими, имунната активност и чрез ултразвукови изображения.

Резултати

1. Случай1 (мъж, 43 г.вирусен хепатит В)

Пациентът получава диагноза хепатит B през2000 г. със симптоми изтощение, лека температура и потъмняване на урината. Той преминава курс на лечение с добавки, укрепващи черния дроб, антивирусна терапия (Nucleozid)и BioBran 1 саше/24ч. ипостига добри резултати от биохимичния тест след лечение с продължителност 18 месеца. Резултатите от изследванията и успехът от лечението са показани в Таблица 1.

Семейна история: Този пациент има по-малък брат, който също е с положителен резултат HBeAg (+), лекуван е с антивирусен медикамент (Tenofovir) и BioBran 1 саше/24ч.

Таблица1: Случай1 (мъж, 43 г., вирусен хепатитB)

Време на лечение Клинични симптоми Биохимични

изследвания Ултразвукови изследванияТестове за откриване на вируса

МедикаментиAST

(U/l)ALT

(U/l)aFP

(ng/ml)HBsAgHBeAgAnti HbcHBV DNA количество(копия/ml)11/2007

(преди лечението)Изтощение, тъмна урина, храносми-лателни проблеми7884(-)Полипи в жлъчния мехур; жлъчен канал: 1,1mm; неравна чернодробна ехограма(+)(-)(+)6.91×106 1-вимесец от лечение 4260      – Лекарство за намаляване на чернодробните ензими,

– Антивирусни лекарства (Entecavir 0,5mg/24ч.),

– BioBran 1 саше/24ч.2-ри месец от лечението 3036      -Антивирусни лекарства(Entecavir 0,5mg/24ч.),

– BioBran 1 саше/24ч.6-тимесец от лечението 3028     2.8×104– Антивирусни лекарства(Entecavir 0,5mg/24ч.),

– BioBran 1 саше/24ч.12-ти месец от лечението 3230     1.84×102Продължава приемът на2-те лекарства за 3 месеца15-ти месец от лечението НормаленНормален       3/4/2010 26.724.3(-)Малки полипи в жлъчния мехур (-) Няма открит- Спиране на антивирусното лекарство

– BioBran 1 саше/24ч.5/7/2010 2618   (-)  Индикация за имунизация срещу HBV

 

2. Случай2 (мъж, 17г.,и неговият по-малък брат, 15г.)

През февруари 2004 г. тези пациенти получават диагноза хепатит В със симптоми изтощение, загуба на тегло, загуба на апетит.

Семейна история: Майката на пациентите има положителен резултат за HBsAg (+)

– Лабораторни изследвания преди лечението:

По-големият брат

По-малкият брат

– Биохимични тестове: AST: 210 (UI/l); ALT: 180 (UI/l), aFP (-)

– HBeAg (+), HBeAg (+), Anti Hbe (-)

– HBV DNA качествен анализ(+++)

– Ултразвуково изследване: неравна чернодробна ехограма, увеличен далак: 2cm под ребрената дъга- Биохимични тестове: AST: 230 (UI/l); ALT: 210 (UI/l), aFP (-)

– HBeAg (+), HBeAg (+), Anti Hbe (-)

– HBV DNA качествен анализ  (+++)

– Ултразвуково изследване: неравна чернодробна ехограма, увеличен далак: 1cm под ребрената дъга

+ Лечение: добавки за укрепване на черния дроб, инхибитор на вируса (Lamivudine 1 таблетка/24ч.)и BioBran 1 саше /24ч.

– Лабораторни изследвания след 6-месечно лечение:

По-големия брат

По-малкия брат

– Чернодробни ензими: AST: 80 (UI/l); ALT: 42 (UI/l)

– HBeAg (+)

– HBV DNA качествен анализ: (+)

– Ултразвуково изследване: неравна чернодробна ехограма, спленомегалия- Чернодробни ензими: AST: 78 (UI/l) ; ALT: 46(UI/l)

– HBeAg (+)

– HBV DNA качествен анализ: (+)

– Ултразвуково изследване: неравна чернодробна ехограма, спленомегалия

+ Продължаващо лечение: добавки за укрепване на черния дроб, инхибитор на вируса(Lamivudine 1 таблетка/24ч.)и BioBran 1 пакет/24ч.

– Лабораторни изследвания след 12-месечно лечение:

По-големия брат

По-малкия брат

– Чернодробни ензими: AST: 28 (UI/l); ALT: 40 (UI/l)

– HBeAg (+)

– HBV DNA качествен анализ: (+)

– Ултразвуково изследване: неравна чернодробна ехограма, спленомегалия- Чернодробни ензими: AST: 30 (UI/l); ALT: 42 (UI/l)

– HBeAg (+)

– HBV DNA качествен анализ: (+)

– Ултразвуково изследване: неравна чернодробна ехограма, спленомегалия

+ Продължаващо лечение: добавки за укрепване на черния дроб, инхибитор на вируса(Lamivudine 1 таблетка/24ч.)и BioBran 1 пакет/24ч.

– Лабораторни изследвания след 24-месечно лечение:

По-големия брат

По-малкия брат

– Чернодробни ензими: AST: 30 (UI/l); ALT: 26 (UI/l)

– HBeAg (+)

– HBV DNA качествен анализ(+)

– Ултразвуково изследване: увеличен далак: 1cm под ребрената дъга- Чернодробни ензими: AST: 28 (UI/l); ALT: 24(UI/l)

– HBeAg (-)

– HBV DNA качествен анализ(±)

– Ултразвуково изследване: нормален далак

+ Спиране на лекарствата, приемат само билков препарат Chanca Piedra.

– Февруари2010г.:

По-големия брат

По-малкия брат

– Загуба на тегло, липса на апетит

– Чернодробни ензими: AST: 40 (UI/l); ALT: 86 (UI/l)

– HBeAg (+), HBeAg количество: 152.800 UI/l

– HBV DNA количество: 106 копия /ml

– Ултразвуково изследване: неравна чернодробна ехограма, увеличен далакпод ребрената дъга- Чернодробни ензими: AST: 28 (UI/l); ALT: 20(UI/l)

Лечение: Лекарства за намаляване на чернодробните ензими, инхибитор на вируса(Entecavir 0,5g/24ч.), BioBran 1 саше/24ч.Спиране на приема на лекарства

– 8/7/2010:

По-големия брат

По-малкия брат

– Чернодробни ензими: AST: 32 (UI/l); ALT: 30 (UI/l)

– HBeAg (-)

– HBV DNA количество: 104 копия/ml

– Ултразвуково изследване: увеличен далакпод ребрената дъга- Чернодробни ензими: AST: 26 (UI/l); ALT: 18 (UI/l)

– HBeAg (-)

– HBV DNA количество: няма открити

– HBeAg качествен анализ: (-)

– Тест заHBeAg (-)

– Ултразвуково изследване: нормално – Индикация за имунизация срещуHBV

– Тези пациенти продължават да използват билкови лекарства (Chanca Piedra)като напитка по време на 6-те години на лечението.

3. Случай3 (жена, 23 г.вирусен хепатит В)

Пациентката е диагностицирана с вирусен хепатит Bедин месец, след като ражда дете, със симптоми изтощение и загуба на апетит. Тя има брат с положителен резултат HBsAg (+). Преминава през лечение с добавки, укрепващи черния дроб, и BioBran 1000 x 1 саше/24ч.и продължава да кърми. Резултатите от изследванията и успехът на лечението са показани в Таблица 2.

Таблица2: Случай3 (жена, 23 г., вирусен хепатит B)

Време на лечение

Клинични симптоми

Биохимични изследвания

Ултразвукови изследвания

Тестове за откриване на вируса

Медикаменти

AST

(U/l)ALT

(U/l)aFP

(ng/ml)HBsAgHBeAgAnti HbcHBV DNA количество(копия/ml)3/2006

(преди лечението)Изтощение, загуба на апетит100120(-)Неравна чернодробна ехограма

(+)(+)(-)105– Лекарство за намаляване на чернодробните ензими,,

– BioBran x 1 саше/24ч.

– Продължава да кърми2-ри месец на лечение 6038       – BioBran x 1 саше/24ч.

– Продължава на кърми

– Подходящ режим и почивка12/2006

9-ти месец на лечение 3228   (-)(+) – Антивирусни лекарства(Entecavir 0,5mg/24ч.),

– BioBran x 1 саше/24ч.5/2007

14-ти месец на лечение НормалниНормални   (-) 103 – BioBran x 1 саше/24ч/9/2009 НормалниНормални   (-)(+)Няма открити- Ражда второ дете

– BioBran x 1 саше /24ч. по време на бременността

 

4. Изводи и препоръки

BioBranсе извлича от оризови трици, поради което е абсолютно безопасен. Настоящите клинични изследвания потвърждават неговата надеждност. BioBran, прилаган като имунотерапия, предотвратява спада на физическата сила и загубата на апетит у пациентите. Те докладват, че когато го приемат, се хранят по-добре.

Комбинирането на BioBran с антивирусни медикаменти оказва положителен ефект върху пациенти с вирусен хепатит В, ако се спазват следните условия:

+ Точно отчитане при пациенти, които имат високи нива чернодробния ензим и на количеството на HBV DNA.

+ Постоянен и редовен прием на лекарствата.

 

Наблюдава се по-добра ефективност при пациенти с вирус на хепатит В, които имат резултат HBeAg (+).И обратното, по-трудно се лекуват пациенти с вирус на хепатит В, които имат резултатHBeAg (-);следователно приемът на 2 сашета/24ч.е препоръчителен при тези пациенти.

 

Литература:
1.D. Lavanchy (2004). Hepatitis B virus epidemiology, disease burden, treatment, and current and emerging prevention and control measures.Journal of Viral Hepatitis 11(2): 97-10.
2.Lok AS, Hussain M, Cursano C et al (2000). Evolution of hepatitis B virus polymerase gene mutations in hepatitis B e antigen negative patients receiving lamivudine therapy. Hepatology 32(5): 1145–1153.
3.Lok AS, Zoulim F, Locarmini S et al (2007). Antiviral drug-resistant HBV standardization of nomendature and assys and recommendations for management. Hepatology 46(1): 254-265.
4.Ghoneum M (1998). Enhancement of Human Natural Killer Cell activitiy by modified Arabinoxylan from Rice Bran (MGN-3). INT.Immunotherapy 14(2): 89-99.
5.Yeo W, Johnson P J (2006). Diagnosis, prevention and management of hepatitis B virus reactivation during anticancer therapy. Hepatology 43(2): 209-220.